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ELISA-Testschritte, Ergebnisse, Typen und Verfahrensrisiken

Last Updated on 10/09/2021 by MTE Leben

Medizinisch begutachtet am 13.07.2020

Fakten, die Sie über ELISA-Tests wissen sollten

Bild des Mikropipettierens von Proben in eine Polystyrolplatte für ein ELISA-Testkit; Foto von James Gathany/CDC

ELISA ist eine Abkürzung für “Enzyme-Linked Immunosorbent Assay”. 1974 entwickelten P. Perlmann und E. Engvall den Test als Ersatz für bestimmte Radioimmunoassay-Tests und ersetzten schließlich den Western-Blot-Test zur HIV-Bestätigung. Der ELISA-Test ist vielseitig und kann von Medizinern im Vergleich zu anderen komplizierteren Tests problemlos durchgeführt werden. viele Variationen sind im Handel erhältlich.

Was ist ein ELISA-Test?

Ein ELISA-Test verwendet Komponenten des Immunsystems (wie IgG- oder IgM-Antikörper) und Chemikalien zum Nachweis von Immunreaktionen im Körper (zum Beispiel gegen infektiöse Mikroben). Der ELISA-Test beinhaltet ein Enzym (ein Protein, das eine biochemische Reaktion katalysiert). Es beinhaltet auch einen Antikörper oder ein Antigen (immunologische Moleküle), die eine Antigen-Antikörper-Reaktion bilden können, um ein positives Ergebnis oder, wenn sie nicht reagieren, ein negatives Ergebnis zu liefern. Beispiele für die Verwendung eines ELISA-Tests umfassen die Diagnose von Infektionen wie HIV (Humanes Immunschwächevirus) und einigen allergischen Erkrankungen wie Nahrungsmittelallergien und experimentelle Untersuchungen zur Identifizierung von Verbindungen (Antigene aus einem Zelllysat in einer Vielzahl von Organismen). ELISA-Tests werden auch als Immunosorbent-Assay oder Enzym-Immunoassay bezeichnet, wenn ein Enzym als Indikator an eine andere Substanz gebunden ist (kann z. B. eine Farbänderung verursachen).

Der Test basiert auf einer Mikrotiterplatte, auf der ein Festphasensubstrat (Zielprotein, Antigen) in bekannter Konzentration auf der Platte fixiert ist, das bei Exposition gegenüber einem Antikörper mit angelagertem Indikator (Farbstoff für Farbumschlag oder enzymmarkierter Antikörper) das kann zu einem Farbwechsel führen. Abhängig von einer Standardkurve für die Absorption von enzymmarkiertem Antikörper gegen die Antigenkonzentration in Bezug auf die Farbänderung des Farbstoffs können Tests eine semiquotative, quantitative und/oder Identifizierung vieler verschiedener Substanzen liefern. Diese Art von Test wird als direkter ELISA bezeichnet.

Es gibt andere Arten von ELISA-Tests. Der indirekte ELISA verwendet einen sekundären Antikörper, um an das Substrat zu binden, und der Sandwich-ELISA, der den Antikörper als Substrat verwendet, das auf der Mikrotiterplatte fixiert ist. Beispiele und zusätzliche Details finden Sie unter http://ruo.mbl.co.jp/bio/e/support/method/elisa.html.

Typen von ELISA-Tests

HIV Test

Antikörpertests werden normalerweise an einer Blutprobe durchgeführt, oft unter Verwendung eines enzymgekoppelten Assays, der als ELISA oder EIA bezeichnet wird. Bei diesem Test darf das Serum einer Person mit im Labor hergestellten Virusproteinen reagieren. Wenn die Person mit HIV infiziert ist, binden die Antikörper im Serum an die HIV-Proteine, und das Ausmaß dieser Bindung kann gemessen werden. Negative EIA-Ergebnisse sind normalerweise innerhalb eines Tages oder so verfügbar.

Was nützt ein ELISA-Test?

ELISA-Tests erkennen hauptsächlich Proteine ​​(im Gegensatz zu kleinen Molekülen und Ionen wie Glukose und Kalium). Mediziner verwenden häufig ELISA-Tests als Bluttests, um Antigene nachzuweisen, die im Blut vorhanden sein können. Zu den durch ELISA-Tests nachgewiesenen Substanzen können Hormone, ein Allergen, virale Antigene (z. B. Dengue-Fieber), bakterielle Antigene (z Beispiel) oder Impfung. Sie können auch einen Erreger einer Infektionskrankheit bei Patienten identifizieren.

Was ist ein ELISA-Kit?

Ein ELISA-Kit ist ein im Handel erhältlicher ELISA-Test, der normalerweise vorbeschichtete Polystyrolplatten, Nachweisantikörper und normalerweise alle Chemikalien enthält, die zur Durchführung eines ELISA-Tests benötigt werden. Es können jedoch spezielle Kits mit vom Kunden bezeichneten Substanzen erworben werden.

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Wie funktioniert der ELISA-Test?

Es gibt Variationen des ELISA-Tests (siehe unten), aber der am häufigsten verwendete Typ besteht aus einem Antikörper, der an einer festen Oberfläche (Polystyrolplatte) befestigt ist. Dieser Antikörper hat eine Affinität für die interessierende Substanz, z. B. ein Hormon, Bakterien oder einen anderen Antikörper (wird sich daran binden). Beispielsweise kann das humane Choriongonadotropin-Hormon (HCG), das häufig gemessene Protein, das eine Schwangerschaft anzeigt, durch ELISA nachgewiesen werden. Dem Testsystem wird eine Mischung aus gereinigtem HCG in Verbindung mit einem Enzym und der Testprobe (Blut oder Urin) zugesetzt. Wenn in der Testprobe kein HCG vorhanden ist, bindet nur das verknüpfte Enzym an die feste Oberfläche. Je mehr interessierende Substanz in der Testprobe vorhanden ist, desto weniger gebundenes Enzym bindet an die feste Oberfläche. Je mehr von der interessierenden Substanz vorhanden ist, führt zu einer Reaktion und zeigt sich in irgendeiner Weise auf der Testplatte, z ).

Welche Arten von ELISA-Tests gibt es? Was ist ein direkter ELISA?

Es gibt vier Typen oder Arten von ELISA-Tests:

Direkter ELISA: Anheftung eines Antigens an eine Polystyrolplatte gefolgt von einem enzymmarkierten Antikörper, der mit dem Antigen und einem messbaren Substrat reagieren kannIndirekter ELISA: Anheftung eines Antigen auf eine Polystyrolplatte, gefolgt von einem unmarkierten oder primären Antikörper, gefolgt von einem enzymmarkierten Antikörper, der sowohl mit dem primären Antikörper als auch mit dem Substrat reagieren kannSandwich-ELISA: Ein Capture-Antikörper wird an die Polystyrolplatte gebunden, dann wird Antigen hinzugefügt, das spezifisch bindet oder einfängt das Antigen. Ein zweiter Antikörper, ebenfalls spezifisch für das Antigen, aber nicht der gleiche wie der Fänger-Antikörper, wird hinzugefügt und “sandwiches” das Antigen. Auf diesen zweiten Antikörper folgt dann ein enzymmarkierter Antikörper, der für den zweiten Antikörper spezifisch ist und mit einem messbaren Substrat reagieren kann.Kompetitiver ELISA: Dieser Test ähnelt dem Sandwich-ELISA, beinhaltet jedoch die Zugabe von konkurrierenden Antikörpern oder Proteinen, wenn der zweite Antikörper hinzugefügt. Dies führt zu einer Abnahme des erzeugten Substratsignals. Dieser Test liefert gute, hochspezifische Ergebnisse.

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Wie führen medizinisches Personal einen ELISA-Test durch?

Das medizinische Personal, das den Test durchführt, sind geschulte Labortechniker, die spezielle Kits verwenden, die die Wechselwirkungen der Antigene mit den Antikörpern im Kit messen. Sie werden Ihren Arzt über die Testergebnisse informieren.

Was sind die Vorteile des ELISA-Tests?

ELISA-Tests sind im Allgemeinen gute und genaue Tests. Sie gelten als hochsensibel und spezifisch (genau) und schneiden im Vergleich zu anderen Methoden zum Nachweis von Stoffen im Körper gut ab. Die ELISA-Testmethode ist einfacher und einfacher durchzuführen als ältere Labortechniken, die oft radioaktives Material erforderten.

Wie bereitet man sich auf einen ELISA-Test vor? Ist ein ELISA-Test schmerzhaft? Welche Risiken sind mit einem ELISA-Verfahren verbunden?

Im Allgemeinen müssen sich Personen nicht auf einen ELISA-Test vorbereiten. Mediziner führen den Test in einem Labor durch. Wenn Ihr Blut benötigt wird, ist die einzige Verletzung die Blutentnahme. Die mit einem ELISA-Test verbundenen Risiken sind selten und mit einer Blutentnahme verbunden (z. B. Infektionen, Gefäßschäden).

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Wie lange dauert es, bis ich ELISA-Testergebnisse erhalte?

Je nachdem, wofür der Test verwendet wird, erhalten Sie möglicherweise innerhalb von 24 Stunden Ergebnisse, wenn der Test lokal durchgeführt wird. Es gibt jedoch einige Tests, die Tage bis Wochen dauern können.

Was bedeuten die Ergebnisse eines ELISA-Tests?

Es gibt viele hundert Variationen von ELISA-Tests. Die Ergebnisse und ihre Bedeutung hängen davon ab, was getestet wird. Beispielsweise kann ein ELISA-Test auf virale RNA diese nachweisen (positiver Test), nicht nachweisen (negativer Test) oder unbestimmt sein (Borderline-Test). In seltenen Fällen kann es zu einem falsch negativen oder falsch positiven Ergebnis kommen. Wenn Sie einen ELISA-Test durchführen lassen, fragen Sie am besten Ihren Arzt, was die Testergebnisse für Ihre individuelle Situation bedeuten.

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Medizinisch begutachtet am 13.07.2020

Verweise

Bonilla, Francisco A. “Funktion und klinische Anwendungen von Immunglobulinen.” Nov. 2018. UpToDate.com. .

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